Resumo

As proteases apresentam grande diversidade bioquímica sendo facilmente manipuláveis, favorecendo dessa maneira sua aplicação biotecnológica. Na indústria de alimentos são amplamente utilizadas em laticínios, massas e na produção de hidrolisados protéicos como também na indústria farmacêutica. Sendo assim, foi testado o efeito de alguns inibidores de proteases, solventes, detergentes e sais frente a uma protease produzida por um clone metagenômico de sedimento de manguezal da Baía de Camamu-BA. Para tanto, a atividade da protease foi testada frente ao substrato cromogênicoBApNA 1,2 mmol.L-1 em tampão Tris-HCl 20 mM incubado a 37 °C, juntamente com inibidores (EDTA, PMSF, 1,10-Fenantrolina), alguns sais (CaCl2, CoCl2, CuSO4, HgCl2, MgSO4, MnSO4, SrCl2, ZnSO4) nas concentrações 1 e 5mM, solventes (acetonitrila, isopropanol e DMSO) e detergentes (SDS e Triton-X100), nas concentrações 0,5 e 1 % e mediu-se o incremento de absorbância decorrente da liberação de -nitroanilina a partir da hidrólise do substrato. A absorbância a 410 nm das reações foram monitoradas, por 4 horas, em espectrofotômetro de microplacas, em intervalos de 15 minutos. A atividade enzimática foi inibida pelos três solventes testados, assim como a inibição provocada por Hg+2 e Mn+4. O íon Cu+2 aumentou a atividade da enzima na concentração de 5mM, ao passo que a inibição foi observada em todos os outros íons. A enzima foi fortemente inibida pelos inibidores EDTA, PMSF e 1,10 fenantrolina. Triton-X100, um detergente não iônico, mostrou efeito positivo na atividade enzimática nas duas concentrações, enquanto que o SDS na concentração 1 % inibiu atividade da enzima. Estudos de efeitos de químicos sobre a atividade enzimática tornam-se importantes no reconhecimento das condições nas quais a atividade enzimática apresenta-se máxima visando aperfeiçoar o desempenho enzimático em processos específicos através da adição de compostos que estimulem a atividade enzimática, ou através da supressão de compostos que possam afetar negativamente a hidrólise enzimática.